Исследование фрагментации ДНК в сперматозоидах методом TUNEL – метод исследования, позволяющий обнаружить разрывы ДНК в сперматозоидах.
Основная задача сперматозоидов при оплодотворении – доставка генома отца, записанного на ДНК, в яйцеклетку. Накопление большого числа повреждений в ДНК приводит к неспособности сперматозоидов оплодотворять яйцеклетку (к бесплодию). Целостность ДНК необходима не только для нормальной оплодотворяющей способности сперматозоидов, но и для гармоничного развития эмбриона после оплодотворения яйцеклетки.
Фрагментация ДНК – это повреждение или разрыв одной или двух цепей молекулы ДНК в сперматозоиде. Чем больше накапливается таких повреждений, тем ниже вероятность наступления беременности. В некоторых случаях яйцеклетка сама способна устранить фрагментацию ДНК. Это возможно, если процент повреждения небольшой и яйцеклетка обладает определённым потенциалом, который уменьшается с возрастом женщины.
Степень фрагментации сперматозоидов изменяется у одного и того же мужчины в течение года. Уменьшить повреждение ДНК можно с помощью приёма антиоксидантов. Однако данные препараты не эффективны, если разрывы ДНК образовались вследствие температурного или токсического воздействия.
Фрагментация ДНК возникает в организме мужчины как итог некачественной «отбраковки» сперматозоидов, обладающих генетическими нарушениями, в семенниках. Либо при вызревании сперматозоидов в придатках яичка нарушается процесс конденсации хроматина клеточного ядра.
Внешние факторы, провоцирующие нарушения в генетическом материале сперматозоидов, это воздействие рентгеновских лучей и химиотерапии, воздействие высоких температур, расширение вен семенного канатика, хронические воспалительные процессы в половых железах.
Определение фрагментации сперматозоидов методом TUNEL позволяет замерить реальное повреждение ДНК. В ходе анализа сперматозоиды вступают в реакцию с особым энзимом, и в их разрывы встраивается меченный флуоресцирующий нуклеотид. Сперматозоиды с поврежденной ДНК начинают светиться зелёным цветом. Их количество подсчитывают под микроскопом.
Показания к выполнению анализа
Бесплодие неустановленной этиологии.
Спонтанные аборты при предыдущих беременностях пары.
При подготовке к применению репродуктивных методов – ЭКО, ИКСИ.
Перед замораживанием спермы для оценки её качества.
Подготовка к исследованию
1. Половое воздержание перед сдачей биоматериала – от 2 до 7 суток.
2. В этот же временной период исключить приём лекарственных средств, не принимать спиртные напитки, нельзя посещать баню и сауну, загорать или посещать солярий (исключить воздействие ультрафиолетового излучения).
3. Если возникла необходимость в повторном исследовании, то период полового воздержания должен быть равен предыдущему.
4. Получение эякулята происходит путём мастурбации. Его собирают в заранее полученный в лаборатории контейнер. Сбор спермы происходит непосредственно в лаборатории, поскольку от момента сбора материала до начала исследования допускается временной промежуток не более часа.
5. Температура для транспортировки спермы – от +27°С до +37°С.
Материал для исследования
Сперма.
Интерпретация результатов
Норма: содержание сперматозоидов с повреждённой ДНК не более 15%.
Появление фрагментации ДНК обусловлено:
1. Врождённые дефекты сперматогенеза (образования сперматозоидов) – дефицит протаминов.
2. Хронические воспалительные заболевания органов половой системы – простатит, везикулит.
3. Варикоцеле.
4. Воздействие факторов окружающей среды: приём лекарственных препаратов, регулярное употребление спиртных напитков, отравление ртутью или свинцом, воздействие радиоактивного излучения.
